Chromotek精品系列--源于羊駝的納米抗體

德國 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于細胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究，公司擁有強大的研發(fā)團隊，有先進的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質(zhì)量的實驗數(shù)據(jù)。
ChromoTek的產(chǎn)品分類：
一、Nano-Trap系列；以產(chǎn)品結(jié)合物為標(biāo)準(zhǔn)，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結(jié)合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質(zhì)粒或細胞系形式)；
四、  高品質(zhì)抗體（標(biāo)簽蛋白抗體和普通抗體）

由一個重鏈可變區(qū)組成的羊駝單域抗體，是目前可以得到的具 有完整功能的穩(wěn)定的可結(jié)合抗原的小單位。分子量僅15 kDa,是 常規(guī)IgG抗體分子量的1 /10。

分子量小

»分子量僅15 kDa,是傳統(tǒng)IgG抗體(150 kDa)的1 /10,或Fab片段(50 kDa)的1/3

»結(jié)構(gòu)簡單穩(wěn)定，僅一個重鏈可變區(qū)，特異性強

應(yīng)用廣泛

»免疫沉淀、免疫熒光、超分辨率成像、表面等離子體共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技術(shù)等

穏定性高

»熱穩(wěn)定性高，可常溫運輸

»化學(xué)穩(wěn)定性高，可忍受苛刻的緩沖及洗脫條件

多重驗證

»序列明確，結(jié)構(gòu)清晰

»應(yīng)用驗證

» SCI文獻引用

親和力高

»表位結(jié)合能力強，不受空間環(huán)境影響

»更高的組織穿透力

Y Nano-Traps

GFP-Trap —免疫沉淀伴侶

產(chǎn)品特色:

»結(jié)構(gòu)穩(wěn)定——不會斷裂，無普通抗體輕鏈與重鏈污染

»性質(zhì)穩(wěn)定——耐高溫，耐苛刻的孵育條件和洗脫條件

»親和力高——抓捕牢固不易脫落，可顯著縮短反應(yīng)時間

應(yīng)用領(lǐng)域：

» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP

» Mass spectrometry (MS)

» Enzyme activity measurements

» ChIP, RIP, iCLIP 分析

識別GFP衍生物：

» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy

GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder

GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A

» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet

» CFP

» BFP

▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound

Y Spot-Tag®

Spot-Tag® （序列PDRVRAVSHWSS）是基于Spot納米抗體的優(yōu)化試劑，用于多種捕獲和檢 測應(yīng)用中。

優(yōu)勢

»通用肽標(biāo)簽，適用范圍廣泛

»針對內(nèi)源水平的標(biāo)簽蛋白進行了優(yōu)化

»納米抗體技術(shù)實現(xiàn)高性能

Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS

t t t t

Screened and mutated positions

應(yīng)用

IP/Co-IP: Spot-Trap®

•單帶純化：下游應(yīng)用中無輕鏈和重鏈

•高親和力，N端或C端融合的解離常數(shù)KD低至6-7 nM

• 65°C高穩(wěn)定性，可耐pH范圍4-10

•樹脂的結(jié)合能力2 1.4mg /ml （對于30 kDa的蛋白質(zhì)）

IF/ WB: Spot-Label

偶聯(lián)ATTO594的抗Spot-Tag期米抗體

•更小的連接誤差,更好的組織穿透力

•成像性能優(yōu)異

-用于WB極度敏感

Protein purification: Spot-Cap

基于期米抗體的親和樹脂

•一步法純化蛋白

Nano-Boosters & Nano-Labels是一類熒光探針,通過將靶標(biāo)蛋白的羊駝單域抗體VhH與熒光染料偶 聯(lián)在一起，Nano-Boosters能夠增強GFP、RFP等熒光蛋白的信號強度，Nano-Labels則能夠更準(zhǔn)確的定 位到靶標(biāo)蛋白位置。

優(yōu)勢

»增強熒光信號，成像效果更出眾

»熒光基團位移偏差小，定位更準(zhǔn)確

»結(jié)構(gòu)小巧且穩(wěn)定，通透性更佳

應(yīng)用

»免疫熒光（IF）

»免疫細胞化學(xué)（ICC）

»免疫組織化學(xué)（IHC）

»組織透明三維成像（DISC。）

»超分辨顯微成像（SPM）

Nano-Caps是納米抗體/VhH偶聯(lián)的瓊脂糖珠,可以高效的進行一步法純化蛋白。

優(yōu)勢

» 一步法純化蛋白

»高結(jié)合力

»可重復(fù)使用

»洗脫溫和

應(yīng)用

»蛋白純化

Chromobodies®是一種熒光納米探針，通過將羊駝單域抗體VhH與熒光蛋白的基因序列融合在一個重組 質(zhì)粒來實現(xiàn)內(nèi)源性靶標(biāo)蛋白在活細胞內(nèi)的可視化和實時分析。

優(yōu)勢

»結(jié)枸小巧穩(wěn)定，易于轉(zhuǎn)化表達

»活細胞成像，內(nèi)源性靶標(biāo)實時分析

»超分辨顯微成像，高通量分析

»不干擾內(nèi)源性靶標(biāo)蛋白功能

應(yīng)用

»高通量分析(HCA)

»免疫熒光(IF)

»活細胞成像(Live cell)

»超分辨顯微成像(SPM)

?

Nanobodies / VhHs

GFP VhH 是否結(jié)合 protein A 或者 protein G ?

GFP VhH 結(jié)合 protein A 但不結(jié)合 protein Go

Nano-Traps

GFP-Trap®對于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在親和力上是否有差別？

GFP-Trap®對于C端GFP融合蛋白有稍微更高的親和力。可以通過延長孵育時間（15-30min延長至l-2h）來補償這個差別。

能否用GFP-Trap®直接從組織樣品（例如位于變性緩沖液）中來純化帶GFP標(biāo)簽的融合蛋白？

理論上來說GFP-Trap®在苛刻的緩沖液體系（例如含有0.1% SDS或者1M尿素的RIPA ）中恨穩(wěn)定。

洗脫的GFP-結(jié)合蛋白是否會與lg二抗發(fā)生交叉反應(yīng)？

GFP-Trap®申的結(jié)合蛋白與山羊、小鼠、大鼠或者人的抗體沒有任何同源性，所以不會與lg二抗發(fā)生非特異性交叉反應(yīng)。

GFP-Trap®的載量如何？

通常 GFP-Trap® Agarose 和 GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩 L 懸浮液可以結(jié)合 8 卩 g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩 L 懸浮液可以結(jié)合1 pgGFPo

Myc-Trap是否識別內(nèi)源性的c-Myc蛋白？

我們尚未發(fā)現(xiàn)Myc-Trap可以識別內(nèi)源性的c-Myc蛋白。由于在c-Myc蛋白的三維結(jié)構(gòu)申對于結(jié)合Myc-Trap至關(guān)重要的一些抗 原表位被隱藏了，所以在非變性條件下a-Myc蛋白很難被Myc-Trap識別到。

如何將帶Myc標(biāo)簽的融合蛋白從Myc-Trap上溫和的洗脫下來？

可以用lx或者2x Myc-peptide競爭性的洗脫。替代性的也可以用8M尿素或者pH2.5的0.2M甘氨酸室溫下洗脫。

Spot標(biāo)簽該構(gòu)建到目的蛋白N端還是C端？能否將Spot標(biāo)簽插入到目的蛋白中間？

N端或者C端都能夠很好的識別。

對于Spot標(biāo)簽插入到目的蛋白中間的得視情況而定。Spot標(biāo)簽多肽需要以線性形式存在而且目的蛋白需要易進入不能有空間阻 礙。需要插入到足鋸大且無結(jié)構(gòu)的環(huán)，或無固有結(jié)構(gòu)的區(qū)域或較長的linker,才能鋸被Spot標(biāo)簽抗體識別。

在還原狀態(tài)下該如何將帶Spot標(biāo)簽的融合蛋白洗脫下來？

可以用Spot標(biāo)簽多肽競爭性的洗脫，或者也可以用pH 1210mM NaOH洗脫（洗脫之后需立即調(diào)整pH ）。